TY - JOUR

T1 - NanoLuc/h-целентеразин: эффективная пара для детекции биолюминесценции in vitro и in vivo

AU - Belovezhets, T. N.

AU - Gladkikh, D. V.

AU - Omelchenko, V. O.

AU - Volkova, O. Y.

AU - Taranin, A. V.

AU - Kulemzin, S. V.

N1 - При поддержке: Работа выполнена в рамках государственного задания ФНИ FWNR-2025-0014 Министерства науки и высшего образования Российской Федерации (соглашение № 075-15-2022-301 от 20.04.2022) NanoLuc/h-целентеразин: эффективная пара для детекции биолюминесценции in vitro и in vivo / Беловежец Т. Н., Гладких Д. В., Омельченко В. О., Волкова О. Ю., Таранин А. В., Кулемзин С.В. // Гематология и трансфузиология. - 2025. - Т. 70. № 2. - С. 146-155. doi: 10.35754/0234-5730-2025-70-2-146-155

PY - 2025

Y1 - 2025

N2 - Введение. Биолюминесцентное мечение опухолевых клеток становится стандартом при проведении доклинических исследований новых противораковых препаратов. Несмотря на разнообразие люцифераз, многие из них не подходят для прижизненной визуализации.Цель: сравнить различные субстраты NanoLucinvitro, атакже показать возможность использования пары NLuc/h-целентеразин для прижизненной визуализации диссеминированных опухолевых клеток с помощью системы IVIS Spectrum.Материалы и методы. Получение целевой клеточной линии и Т-клеток, экспрессирующих химерные антигенные рецепторы (Chimeric antigen receptor, CAR), осуществляли методом лентивирусной трансдукции клеток, измерение люминесценции производили планшетным люминометром «Luminoskan™ Microplate Luminometer», для in vivo визуализации в экспериментальной модели CAR T-клеточной терапии на мышах линии NSG использовалась система прижизненной визуализации IVIS Spectrum.Результаты. Проведено сравнение различных субстратов в тестах in vitro по сопоставлению яркости и стабильности люминесценции, а также показана возможность использования h-целентеразина в паре с люциферазой Nluc для прижизненной визуализации клеток в мышах. Получена генетически модифицированная клеточная линия Nalm6-NLuc-copGFP.Заключение. Полученные результаты сравнения различных субстратов для люциферазы Nluc в тестах in vitro и in vivo позволили определить оптимальную пару фермент/субстрат, которая может быть востребована в качестве инструмента для исследований эффективности, безопасности и токсичности соединений и клеточных продуктов, разрабатываемых для противоопухолевой терапии. Плазмидная конструкция, кодирующая Nluc, может быть использована для модификации других клеточных линий, необходимых для разработки и характеризации новых генно-терапевтических подходов.

AB - Введение. Биолюминесцентное мечение опухолевых клеток становится стандартом при проведении доклинических исследований новых противораковых препаратов. Несмотря на разнообразие люцифераз, многие из них не подходят для прижизненной визуализации.Цель: сравнить различные субстраты NanoLucinvitro, атакже показать возможность использования пары NLuc/h-целентеразин для прижизненной визуализации диссеминированных опухолевых клеток с помощью системы IVIS Spectrum.Материалы и методы. Получение целевой клеточной линии и Т-клеток, экспрессирующих химерные антигенные рецепторы (Chimeric antigen receptor, CAR), осуществляли методом лентивирусной трансдукции клеток, измерение люминесценции производили планшетным люминометром «Luminoskan™ Microplate Luminometer», для in vivo визуализации в экспериментальной модели CAR T-клеточной терапии на мышах линии NSG использовалась система прижизненной визуализации IVIS Spectrum.Результаты. Проведено сравнение различных субстратов в тестах in vitro по сопоставлению яркости и стабильности люминесценции, а также показана возможность использования h-целентеразина в паре с люциферазой Nluc для прижизненной визуализации клеток в мышах. Получена генетически модифицированная клеточная линия Nalm6-NLuc-copGFP.Заключение. Полученные результаты сравнения различных субстратов для люциферазы Nluc в тестах in vitro и in vivo позволили определить оптимальную пару фермент/субстрат, которая может быть востребована в качестве инструмента для исследований эффективности, безопасности и токсичности соединений и клеточных продуктов, разрабатываемых для противоопухолевой терапии. Плазмидная конструкция, кодирующая Nluc, может быть использована для модификации других клеточных линий, необходимых для разработки и характеризации новых генно-терапевтических подходов.

KW - CAR T-клеточная терапия

KW - биолюминесценция

KW - доклинические исследования

KW - фуримазин

KW - h-целентеразин,

KW - нативный целентеразин,

KW - люцифераза NanoLuc

UR - https://www.mendeley.com/catalogue/6f6325c1-2080-31d3-be06-85bff2ac2534/

UR - https://elibrary.ru/item.asp?id=82607419

U2 - 10.35754/0234-5730-2025-70-2-146-155

DO - 10.35754/0234-5730-2025-70-2-146-155

M3 - статья

VL - 70

SP - 146

EP - 155

JO - Russian journal of hematology and transfusiology

JF - Russian journal of hematology and transfusiology

SN - 0234-5730

IS - 2

ER -