TY - JOUR

T1 - Получение дендритных клеток мышей in vitro с помощью Flt3-L и их характеристика

AU - Tereshchenko, V. P.

AU - Bulygin, A. S.

AU - Zavodskii, R. Yu

AU - Kulikova, E. V.

AU - Sennikov, S. V.

N1 - Терещенко В.П., Булыгин А.С., Заводский Р.Ю., Куликова Е.В., Сенников С.В. Получение дендритных клеток мышей invitro с помощью Flt3-L и их характеристика // Иммунология. - 2020. - Т. 41. - № 3. - С. 215-226

PY - 2020

Y1 - 2020

N2 - Введение. В настоящее время для модуляции адаптивного иммунного ответа с целью коррекции тех или иных заболеваний человека активно разрабатываются клеточные вакцины на основе миелоидных дендритных клеток (мДК). Однако об эффективности применения плазмацитоидных дендритных клеток (пДК) в тех же целях все еще мало данных. Цель исследования - разработка протокола получения пДК мышей с помощью рекомбинантного Flt3-L in vitro и описание фенотипических и функциональных свойств полученных дендритных клеток (ДК) для решения вопроса о возможности их использования при создании клеточных вакцин. Материал и методы. ДК получали путем культивирования клеток костного мозга мышей в присутствии Flt3-L. Относительное количество и фенотип ДК оценивали с помощью проточной цитофлуориметрии, а морфологию ДК - с помощью флуоресцентной микроскопии. Функциональные свойства ДК изучали по их способности индуцировать Трег-клетки и пролиферацию СD4+-лимфоцитов в смешанной культуре лимфоцитов. Экспрессию рецептора хемотаксиса CCR9 на ДК оценивали с помощью проточной цитофлуориметрии. Результаты. Показано, что c помощью Flt3-L из клеток костного мозга мышей возможно in vitro получение культур ДК с относительно высоким содержанием B220+CD11c+-пДК и Sirpa+CD11c+-мДК. B220+CD11c+-пДК и Sirpa+CD11c+-мДК в полученных культурах отличались морфологией и степенью зрелости. В смешанной культуре лимфоцитов полученные in vitro ДК, обладали свойствами незрелых ДК, что проявлялось в их способности генерировать повышенное количество Трег и вызывать сниженную пролиферацию CD4+-лимфоцитов. При стимуляции полученных ДК с помощью CpG ДНК наблюдалось их созревание, и снижение способности к индукции Трег и увеличение способности к индукции пролиферации CD4+-лимфоцитов, т. е. приобретение иммуногенной функции. Относительно небольшое количество В220+CD11с+-пДК и Sirpa+CD11c+-мДК несли на поверхности рецептор хемотаксиса CCR9, однако количество В220+CD11с+-пДК и Sirpa+CD11c+-мДК, несущих CCR9 внутриклеточно, стремилось к 100 %. Заключение. Таким образом, с помощью Flt3-L из клеток костного мозга мышей возможно in vitro получение культур В220+CD11с+-пДК и Sirpa+CD11c+-мДК, пригодных к применению при разработке клеточных вакцин для подавления нежелательного адаптивного иммунного ответа и для индукции желательного.

AB - Введение. В настоящее время для модуляции адаптивного иммунного ответа с целью коррекции тех или иных заболеваний человека активно разрабатываются клеточные вакцины на основе миелоидных дендритных клеток (мДК). Однако об эффективности применения плазмацитоидных дендритных клеток (пДК) в тех же целях все еще мало данных. Цель исследования - разработка протокола получения пДК мышей с помощью рекомбинантного Flt3-L in vitro и описание фенотипических и функциональных свойств полученных дендритных клеток (ДК) для решения вопроса о возможности их использования при создании клеточных вакцин. Материал и методы. ДК получали путем культивирования клеток костного мозга мышей в присутствии Flt3-L. Относительное количество и фенотип ДК оценивали с помощью проточной цитофлуориметрии, а морфологию ДК - с помощью флуоресцентной микроскопии. Функциональные свойства ДК изучали по их способности индуцировать Трег-клетки и пролиферацию СD4+-лимфоцитов в смешанной культуре лимфоцитов. Экспрессию рецептора хемотаксиса CCR9 на ДК оценивали с помощью проточной цитофлуориметрии. Результаты. Показано, что c помощью Flt3-L из клеток костного мозга мышей возможно in vitro получение культур ДК с относительно высоким содержанием B220+CD11c+-пДК и Sirpa+CD11c+-мДК. B220+CD11c+-пДК и Sirpa+CD11c+-мДК в полученных культурах отличались морфологией и степенью зрелости. В смешанной культуре лимфоцитов полученные in vitro ДК, обладали свойствами незрелых ДК, что проявлялось в их способности генерировать повышенное количество Трег и вызывать сниженную пролиферацию CD4+-лимфоцитов. При стимуляции полученных ДК с помощью CpG ДНК наблюдалось их созревание, и снижение способности к индукции Трег и увеличение способности к индукции пролиферации CD4+-лимфоцитов, т. е. приобретение иммуногенной функции. Относительно небольшое количество В220+CD11с+-пДК и Sirpa+CD11c+-мДК несли на поверхности рецептор хемотаксиса CCR9, однако количество В220+CD11с+-пДК и Sirpa+CD11c+-мДК, несущих CCR9 внутриклеточно, стремилось к 100 %. Заключение. Таким образом, с помощью Flt3-L из клеток костного мозга мышей возможно in vitro получение культур В220+CD11с+-пДК и Sirpa+CD11c+-мДК, пригодных к применению при разработке клеточных вакцин для подавления нежелательного адаптивного иммунного ответа и для индукции желательного.

KW - Ccr9

KW - Flt3-l

KW - Myeloid dendritic cells

KW - Plasmacytoid dendritic cells

UR - http://www.scopus.com/inward/record.url?scp=85097165750&partnerID=8YFLogxK

UR - https://www.elibrary.ru/item.asp?id=43718769

U2 - 10.33029/0206-4952-2020-41-3-215-226

DO - 10.33029/0206-4952-2020-41-3-215-226

M3 - статья

AN - SCOPUS:85097165750

VL - 41

SP - 215

EP - 226

JO - Immunologiya

JF - Immunologiya

SN - 0206-4952

IS - 3

ER -