TY - JOUR

T1 - Оптимизация продукции рекомбинантного аденоассоциированного вируса 9 серотипа

AU - Aliev, T I

AU - Imatdinov, I R

N1 - Алиев Т.И., Иматдинов И.Р. Оптимизация продукции рекомбинантного аденоассоциированного вируса 9 серотипа // Молекулярная биология. – 2025. – Т. 59. - № 4. – С. 655-662. – DOI 10.31857/S0026898425040113. – EDN GIGCQM. Работа выполнена при поддержке Министерства науки и высшего образования Российской Федерации (Федеральная научно-техническая программа развития генетических технологий на 2019-2030 годы, соглашение № 075-15-2025-526).

PY - 2025

Y1 - 2025

N2 - Векторы на основе аденоассоциированных вирусов (ААV) зарекомендовали себя как удобный инструмент геномного редактирования. Однако для трансгенеза лабораторных животных или генной терапии заболеваний человека требуется высокий титр ААV, в получении которого заключается основная трудность. Мы провели оптимизацию условий получения ААV серотипа 9 (ААV9) с целью повышения выхода вируса. Широко распространенный подход подразумевает трансфекцию клеток-продуцентов тремя плазмидами. Мы провели трансфекцию двумя плазмидами, кодирующими все необходимые компоненты для продукции ААV9. Это позволило повысить итоговый титр в четыре раза. Оптимизация по молярному соотношению плазмиды, содержащей ген интереса, и плазмиды, кодирующей белки репликативного комплекса, капсида и вспомогательных факторов, привела к двукратному повышению титра. Оптимизация состава производственной среды для продукции ААV9 позволила существенно повысить выход вируса. При замене производственной среды DMEM-F12 на менее питательную - DMEM - с добавкой эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота выход ААV9 увеличился почти на 3 порядка. Таким образом, оптимизация числа и соотношения плазмид, а также состава производственной среды позволили многократно повысить продукцию ААV9 и достичь итогового титра в 2.5 × 1012 векторных геномов в 1 мл культуральной среды адгезивных клеток линии HEK293T.

AB - Векторы на основе аденоассоциированных вирусов (ААV) зарекомендовали себя как удобный инструмент геномного редактирования. Однако для трансгенеза лабораторных животных или генной терапии заболеваний человека требуется высокий титр ААV, в получении которого заключается основная трудность. Мы провели оптимизацию условий получения ААV серотипа 9 (ААV9) с целью повышения выхода вируса. Широко распространенный подход подразумевает трансфекцию клеток-продуцентов тремя плазмидами. Мы провели трансфекцию двумя плазмидами, кодирующими все необходимые компоненты для продукции ААV9. Это позволило повысить итоговый титр в четыре раза. Оптимизация по молярному соотношению плазмиды, содержащей ген интереса, и плазмиды, кодирующей белки репликативного комплекса, капсида и вспомогательных факторов, привела к двукратному повышению титра. Оптимизация состава производственной среды для продукции ААV9 позволила существенно повысить выход вируса. При замене производственной среды DMEM-F12 на менее питательную - DMEM - с добавкой эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота выход ААV9 увеличился почти на 3 порядка. Таким образом, оптимизация числа и соотношения плазмид, а также состава производственной среды позволили многократно повысить продукцию ААV9 и достичь итогового титра в 2.5 × 1012 векторных геномов в 1 мл культуральной среды адгезивных клеток линии HEK293T.

KW - АДЕНОАССОЦИИРОВАННЫЙ ВИРУС

KW - ТРАНСФЕКЦИЯ

KW - КЛЕТКИ HEK293T

KW - ТРАНСГЕНЕЗ

KW - ГЕННАЯ ТЕРАПИЯ

KW - Humans

KW - HEK293 Cells

KW - Genetic Vectors/genetics

KW - Plasmids/genetics

KW - Serogroup

KW - Transfection

KW - Dependovirus/genetics

KW - Culture Media/chemistry

KW - Animals

KW - Capsid Proteins/genetics

UR - https://www.scopus.com/inward/record.uri?partnerID=HzOxMe3b&scp=105018654524&origin=inward

UR - https://www.elibrary.ru/item.asp?id=82937992

U2 - 10.31857/S0026898425040113

DO - 10.31857/S0026898425040113

M3 - статья

C2 - 41090340

VL - 59

SP - 655

EP - 662

JO - Molekulyarnaya Biologiya

JF - Molekulyarnaya Biologiya

SN - 0026-8984

IS - 4

M1 - 11

ER -