TY - JOUR

T1 - Индукция экспрессии Т-клеточных рецепторов против эпитопов антигенов, ассоциированных с меланомой, клонирование и получение генетически модифицированных TRC-T-клеток

AU - Shevchenko, Yu A.

AU - Lopatnikova, J. A.

AU - Fisher, M. S.

AU - Kurilin, V. V.

AU - Philippova, J. G.

AU - Alsallum, A.

AU - Alrhmun, S.

AU - Perik-Zavodskaia, O. Yu

AU - Perik-Zavodskii, R. Yu

AU - Nazarov, K. V.

AU - Bulygin, A. S.

AU - Golikova, E. A.

AU - Shangina, P. A.

AU - Gizbrecht, A. A.

AU - Vorobyeva, O. P.

AU - Silkov, A. N.

AU - Sennikov, S. V.

N1 - РНФ 21-65-00004

PY - 2025

Y1 - 2025

N2 - Введение. Способность иммунных клеток уничтожать опухолевые клетки за счет распознавания опухолевых антигенов T-клеточным рецептором (TCR) и передача активирующих сигналов внутрь клетки лежит в основе современной иммунотерапии онкологических заболеваний. Развитие технологии изоляции и клонирования рецепторов Т-клеток и генной инженерии позволило создать Т-клетки пациентов, кодирующие TCR к опухолевым антигенам, способные эффективно уничтожать опухолевые клетки. Цель – получение генетически модифицированных TCR-T-клеток, нацеленных на распознавание эпитопов антигенов, ассоциированных с меланомой, с помощью индукции антиген-специфических Т-клеток и секвенирования РНК единичных клеток. Материал и методы. Мононуклеарные клетки периферической крови здоровых доноров с генотипом HLA-A02 были использованы для генерации дендритных клеток, нагруженных пептидами целевых антигенов и последующей клональной экспансии антиген-специфических T-клеток. Анализ последовательности TCR проводили с помощью РНК-секвенирования единичных клеток. Биоинформатический анализ с использованием разных подходов позволил получить последовательности TCR для последующего клонирования и экспрессии в лентивирусном векторе. Полученные векторы были использованы для трансдукции Т-клеток и оценки цитотоксической активности против клеточных линий меланомы с наличием экспрессии PRAME и MART-1 [SK-Mel-5 и SKMel37, предоставлены профессором Х. Шику из коллекции Высшей школы медицины Университета Миэ (Япония)]. Трансдуцированные T-клетки культивировали с опухолевыми клетками в соотношении 10 : 1, а цитотоксический эффект оценивали по уровню фермента лактатдегидрогеназы, который выделяется из лизированных клеток. Результаты. В результате клональной экспансии было получено практически 1000-кратное обогащение исходной популяции антиген-специфических клеток. Клетки со стабильной экспансией специфических TCR и пролиферативной активностью были использованы для анализа транскриптома на платформе BD Rhapsody. Для определения оптимальной стратегии выбора антиген-специфических TCR мы использовали нейросеть ERGO-II, предсказывающую аффинитет TCR к целевому пептиду антигена PRAME, и определяли доминантность клонотипа для TCR, распознающих MART-1. Трансдукция Т-лимфоцитов лентивирусными конструкциями, кодирующими полученные TCR, привела к лизису не менее 30 % клеток-мишеней в первые же сутки взаимодействия с опухолевыми клетками. Заключение. Мы достигли значительного обогащения популяции целевых антигенспецифических клеток в количествах, достаточных для проведения анализа транскриптома единичных клеток и клонотипов Т-клеток. С помощью технологии секвенирования РНК единичных клеток получили подробную информацию о последовательности каждого TCR и иммунном транскриптоме единичной Т-клетки, что позволило точно сконструировать полученные клоны TCR, оценить функциональное состояние клеток и улучшить отбор клонов-кандидатов TCR. Полученные последовательности для TCR были использованы для наработки лентивирусных конструкций, показавших свою эффективность при взаимодействии Т-клеток, трансдуцированных этими конструкциями, с клетками-мишенями.

AB - Введение. Способность иммунных клеток уничтожать опухолевые клетки за счет распознавания опухолевых антигенов T-клеточным рецептором (TCR) и передача активирующих сигналов внутрь клетки лежит в основе современной иммунотерапии онкологических заболеваний. Развитие технологии изоляции и клонирования рецепторов Т-клеток и генной инженерии позволило создать Т-клетки пациентов, кодирующие TCR к опухолевым антигенам, способные эффективно уничтожать опухолевые клетки. Цель – получение генетически модифицированных TCR-T-клеток, нацеленных на распознавание эпитопов антигенов, ассоциированных с меланомой, с помощью индукции антиген-специфических Т-клеток и секвенирования РНК единичных клеток. Материал и методы. Мононуклеарные клетки периферической крови здоровых доноров с генотипом HLA-A02 были использованы для генерации дендритных клеток, нагруженных пептидами целевых антигенов и последующей клональной экспансии антиген-специфических T-клеток. Анализ последовательности TCR проводили с помощью РНК-секвенирования единичных клеток. Биоинформатический анализ с использованием разных подходов позволил получить последовательности TCR для последующего клонирования и экспрессии в лентивирусном векторе. Полученные векторы были использованы для трансдукции Т-клеток и оценки цитотоксической активности против клеточных линий меланомы с наличием экспрессии PRAME и MART-1 [SK-Mel-5 и SKMel37, предоставлены профессором Х. Шику из коллекции Высшей школы медицины Университета Миэ (Япония)]. Трансдуцированные T-клетки культивировали с опухолевыми клетками в соотношении 10 : 1, а цитотоксический эффект оценивали по уровню фермента лактатдегидрогеназы, который выделяется из лизированных клеток. Результаты. В результате клональной экспансии было получено практически 1000-кратное обогащение исходной популяции антиген-специфических клеток. Клетки со стабильной экспансией специфических TCR и пролиферативной активностью были использованы для анализа транскриптома на платформе BD Rhapsody. Для определения оптимальной стратегии выбора антиген-специфических TCR мы использовали нейросеть ERGO-II, предсказывающую аффинитет TCR к целевому пептиду антигена PRAME, и определяли доминантность клонотипа для TCR, распознающих MART-1. Трансдукция Т-лимфоцитов лентивирусными конструкциями, кодирующими полученные TCR, привела к лизису не менее 30 % клеток-мишеней в первые же сутки взаимодействия с опухолевыми клетками. Заключение. Мы достигли значительного обогащения популяции целевых антигенспецифических клеток в количествах, достаточных для проведения анализа транскриптома единичных клеток и клонотипов Т-клеток. С помощью технологии секвенирования РНК единичных клеток получили подробную информацию о последовательности каждого TCR и иммунном транскриптоме единичной Т-клетки, что позволило точно сконструировать полученные клоны TCR, оценить функциональное состояние клеток и улучшить отбор клонов-кандидатов TCR. Полученные последовательности для TCR были использованы для наработки лентивирусных конструкций, показавших свою эффективность при взаимодействии Т-клеток, трансдуцированных этими конструкциями, с клетками-мишенями.

KW - T-cell receptor (TCR)

KW - affinity

KW - clonotype

KW - melanoma

KW - sequencing

KW - transciptome

UR - https://www.mendeley.com/catalogue/15865ee8-01c1-380f-88d6-cedf51e52c61/

UR - https://www.scopus.com/inward/record.uri?partnerID=HzOxMe3b&scp=105010286576&origin=inward

UR - https://cyberleninka.ru/article/n/induktsiya-ekspressii-t-kletochnyh-retseptorov-protiv-epitopov-antigenov-assotsiirovannyh-s-melanomoy-klonirovanie-i-poluchenie/viewer

U2 - 10.33029/1816-2134-2025-46-2-201-214

DO - 10.33029/1816-2134-2025-46-2-201-214

M3 - статья

VL - 46

SP - 201

EP - 214

JO - Immunologiya

JF - Immunologiya

SN - 0206-4952

IS - 2

ER -