TY - JOUR

T1 - Определение сравнительной активности ключевых ферментов эксцизионной репарации оснований в клеточных экстрактах

AU - Кладова, Ольга Алексеевна

AU - Яковлев, Данила Алексеевич

AU - Groisman, Regina

AU - Ishchenko, Alexander A.

AU - Saparbaev, Murat K.

AU - Федорова, Ольга Семеновна

AU - Кузнецов, Никита Александрович

N1 - Кладова О.А., Яковлев Д.А., Гроисман Р., Ищенко А.А., Сапарбаев М.К., Федорова О.С., Кузнецов Н.А. Определение сравнительной активности ключевых ферментов эксцизионной репарации оснований в клеточных экстрактах // Биохимия. - 2020. - Т. 85. - № 4. - С. 556-566. Работа выполнена при частичной финансовой поддержке проекта ПФНИ ГАН (АААА-А17-117020210022-4). Часть работы, включающая апробацию ДНК-субстратов типа I и II на монофункциональных ДНК-гликозилазах MBD4 и TDG, поддержана грантом РНФ (16-14-10038). Часть работы, включающая дизайн ДНК-зондов и определение активности ферментов репарации в линиях клеток, поддержана грантом РНФ (18-14-00135). Работа также частично поддержана Ligue National Contre le Cancer «Equipe Labellisee», Electricité de France #RB 2017 (M.S.) и French National Research Agency #ANR-18-CE44-0008, и Fondation ARC #PJA-20181208015 (A.A.I.).

PY - 2020

Y1 - 2020

N2 - Поврежденные азотистые основания ДНК удаляются в процессе эксцизионной репарации оснований. Этот ферментативный процесс начинается с действия одной из ДНК-гликозилаз, которые находят и удаляют поврежденные гетероциклические основания путем гидролиза N-гликозидных связей с образованием апуринового/апиримидинового сайта (AP-сайта). Затем апуриновая/апиримидиновая эндонуклеаза APE1 гидролизует фосфодиэфирную связь с 5′-стороны от АР-сайта с образованием одноцепочечного разрыва в ДНК. Снижение функциональной активности отдельных ферментов BER связано с повышенным риском развития сердечно-сосудистых, нейродегенеративных и онкологических заболеваний. В данной работе проведена разработка и апробация метода флуоресцентного анализа для измерения активности ключевых ДНК-гликозилаз и AP-эндонуклеазы человека в клеточных экстрактах. Эффективность флуоресцентных ДНК-зондов проверяли с помощью очищенных ферментов. Перспективные конструкции зондов были испытаны для определения активности ферментов в экстрактах клеточных линий A549, MCF7, HeLa, WT-7, HEK293T и HKC8. Показано, что общий уровень активности ферментов, отвечающих за репарацию АР-сайтов, удаление урацила и 5,6-дигидроурацила, был выше в линиях раковых клеток по сравнению с нормальной линией клеток почек человека HKC8.

AB - Поврежденные азотистые основания ДНК удаляются в процессе эксцизионной репарации оснований. Этот ферментативный процесс начинается с действия одной из ДНК-гликозилаз, которые находят и удаляют поврежденные гетероциклические основания путем гидролиза N-гликозидных связей с образованием апуринового/апиримидинового сайта (AP-сайта). Затем апуриновая/апиримидиновая эндонуклеаза APE1 гидролизует фосфодиэфирную связь с 5′-стороны от АР-сайта с образованием одноцепочечного разрыва в ДНК. Снижение функциональной активности отдельных ферментов BER связано с повышенным риском развития сердечно-сосудистых, нейродегенеративных и онкологических заболеваний. В данной работе проведена разработка и апробация метода флуоресцентного анализа для измерения активности ключевых ДНК-гликозилаз и AP-эндонуклеазы человека в клеточных экстрактах. Эффективность флуоресцентных ДНК-зондов проверяли с помощью очищенных ферментов. Перспективные конструкции зондов были испытаны для определения активности ферментов в экстрактах клеточных линий A549, MCF7, HeLa, WT-7, HEK293T и HKC8. Показано, что общий уровень активности ферментов, отвечающих за репарацию АР-сайтов, удаление урацила и 5,6-дигидроурацила, был выше в линиях раковых клеток по сравнению с нормальной линией клеток почек человека HKC8.

UR - https://www.elibrary.ru/item.asp?id=42731751

UR - https://www.mendeley.com/catalogue/c2a05f8a-446c-3609-8fca-3ef9d9ac60bf/

U2 - 10.31857/S0320972520040089

DO - 10.31857/S0320972520040089

M3 - статья

VL - 85

SP - 556

EP - 566

JO - Биохимия

JF - Биохимия

SN - 0320-9725

IS - 4

M1 - 8

ER -