TY - JOUR

T1 - Здесь и там: двусторонняя локализация интеграций трансгена

AU - Salnikov, P. A.

AU - Khabarova, A. A.

AU - Koksharova, G. S.

AU - Mungalov, R.

AU - Belokopytova, P. S.

AU - Pristyazhnuk, I. E.

AU - Nurislamov, A. R.

AU - Somatich, P.

AU - Gridina, M. M.

AU - Fishman, V. S.

N1 - Сальников П.А, Хабарова А.А., Кокшарова Г.С., Мунгалов Р.В., Белокопытова П.С., Пристяжнюк И.Е., Нурисламов А.Р., Соматич П., Гридина М.М., Фишман В.С. Здесь и там: двусторонняя локализация интеграций трансгена // Вавиловский журнал генетики и селекции. - 2021. - Т. 25. - № 6. - C. 607-612.

PY - 2021/10

Y1 - 2021/10

N2 - Полногеномные скрининговые методы, основанные на случайной интеграции экзогенных генетических конструкций, - новейший класс инструментов, открывающий возможности для изучения широкого спектра геномных процессов. Данный подход уже был применен к функциональному аннотированию генов млекопитающих, скринингу приспособленности бактерий, определению сайтов связывания факторов транскрипции, идентификации регуляторных генетических элементов и исследованию хромосомного эффекта положения. Все эти эксперименты требуют точной локализации трансгенов в геноме. Существующие на сегодняшний день методы картирования, такие как Inverse-PCR, TLA, splinkerette PCR и LAM-PCR, не позволяют одновременно определять оба участка генома, фланкирующие одну интеграцию трансгена, что ограничивает применимость подходов, в том числе связанных с хромосомной инженерией. В настоящей работе мы предлагаем метод, с помощью которого можно преодолеть это ограничение. Разработанная технология основана на фрагментации геномной ДНК, не затрагивающей интеграции трансгена. Это достигается путем исключения из последовательности вектора сайтов узнавания одного или нескольких ферментов рестрикции. Затем, как и в Inverse-PCR, были закольцованы молекулы лигированием в разбавленной смеси и секвенированы. Полученные данные дают возможность с высокой точностью идентифицировать перестройки и отделить их от артефактов лигирования, и, кроме того, отследить события транслокаций между интеграциями трансгенов. Это может быть использовано в экспериментах по изучению индуцируемых хромосомных перестроек. Для доказательства применимости метода мы с его помощью картировали интеграции транспозона Sleeping Beauty в клетки человека линии Hap1. Картированные интеграции были валидированы с помощью ПЦР-анализа. В статье приведен ряд рекомендаций для практического использования этого метода в экспериментах по множественной локализации интеграций трансгенных конструкций.

AB - Полногеномные скрининговые методы, основанные на случайной интеграции экзогенных генетических конструкций, - новейший класс инструментов, открывающий возможности для изучения широкого спектра геномных процессов. Данный подход уже был применен к функциональному аннотированию генов млекопитающих, скринингу приспособленности бактерий, определению сайтов связывания факторов транскрипции, идентификации регуляторных генетических элементов и исследованию хромосомного эффекта положения. Все эти эксперименты требуют точной локализации трансгенов в геноме. Существующие на сегодняшний день методы картирования, такие как Inverse-PCR, TLA, splinkerette PCR и LAM-PCR, не позволяют одновременно определять оба участка генома, фланкирующие одну интеграцию трансгена, что ограничивает применимость подходов, в том числе связанных с хромосомной инженерией. В настоящей работе мы предлагаем метод, с помощью которого можно преодолеть это ограничение. Разработанная технология основана на фрагментации геномной ДНК, не затрагивающей интеграции трансгена. Это достигается путем исключения из последовательности вектора сайтов узнавания одного или нескольких ферментов рестрикции. Затем, как и в Inverse-PCR, были закольцованы молекулы лигированием в разбавленной смеси и секвенированы. Полученные данные дают возможность с высокой точностью идентифицировать перестройки и отделить их от артефактов лигирования, и, кроме того, отследить события транслокаций между интеграциями трансгенов. Это может быть использовано в экспериментах по изучению индуцируемых хромосомных перестроек. Для доказательства применимости метода мы с его помощью картировали интеграции транспозона Sleeping Beauty в клетки человека линии Hap1. Картированные интеграции были валидированы с помощью ПЦР-анализа. В статье приведен ряд рекомендаций для практического использования этого метода в экспериментах по множественной локализации интеграций трансгенных конструкций.

KW - transgenesis

KW - genome-wide screening

KW - transgene mapping

KW - sleeping beauty transposon

KW - TRANSLOCATION

KW - CHROMATIN

UR - http://www.scopus.com/inward/record.url?scp=85122211667&partnerID=8YFLogxK

UR - https://elibrary.ru/item.asp?id=46712765

U2 - 10.18699/VJ21.068

DO - 10.18699/VJ21.068

M3 - статья

C2 - 34755021

VL - 25

SP - 607

EP - 612

JO - Вавиловский журнал генетики и селекции

JF - Вавиловский журнал генетики и селекции

SN - 2500-0462

IS - 6

M1 - 1

ER -